Seminario IPE - Viernes 30 de Octubre

Resumen del Seminario Viernes 30 de Octubre

Lic. Carlos L. Hoyos

Becario Doctoral CONICET

Director: Jorge Diego Marco

Instituto de Patología Experimental

UNSa-CONICET

"Aplicaciones de métodos  basados en el análisis de ADN de Leishmania al estudio de los componentes del ciclo de transmisión de leishmaniasis tegumentaria local"

Se presentan avances del plan de doctorado relacionados a tres objetivos parciales: 1) Evaluación del desempeño diagnóstico de un  PCR sobre DNA kinetoplastidico del género Leishmania aplicado a pacientes con sospecha de leishmaniasis tegumentaria (LTA). 2) Estandarización de la técnica denominada reacción en cadena de la polimerasa de baja astringencia con un único iniciador específico (LSSP-PCR) y 3) Muestreo de micromamíferos silvestres asociados a casos de leishmaniasis. Se procesaron por PCR genérica, un total de 137 muestras de pacientes obtenidas con palillos e hisopos a partir del borde de lesión, se estimó la sensibilidad, especificidad y valores predictivos. Para la aplicación de la técnica LSSP-PCR sobre ADN extraído de cultivos, se determinó las condiciones óptimas de  temperatura y concentración de ADN molde, utilizando cepas correspondientes a Leishmania (Viannia) braziliensis y L. (Leishmania) infantum. Para el relevamiento de micromamíferos potenciales reservorios, se realizó un pre muestreo de roedores silvestres en sitios cercanos a una vivienda donde se registraron varios casos de LTA. 1-La sensibilidad y especificidad de la PCR genérica fue de 62 y 83% respectivamente, el valor predictivo positivo fue de 91% y el negativo fue de 44%.2-La temperatura de annealing óptima para la LSSP PCR  fue 30 y 35ºC y concentración de ADN de 10 a 20 ng/uL. Los patrones obtenidos se muestras en geles de poliacrilamida teñidos con nitrato de plata. 3- Se capturaron 5 ejemplares de la especie Calomys callosus y un ejemplar de Thylamys sponsoria. Los parámetros diagnósticos para la PCR genérica obtenidos corresponden a una evaluación preliminar de la técnica aplicada sobre muestras tomadas por distintos procedimientos. Basados en esta caracterización preliminar se discutirán los pasos a implementar para incrementar su desempeño. En cuanto a la aplicación de la LSSP-PCR se logró determinar patrones precisos y distintivos para las cepas de especies evaluadas. Se tratará de determinar si los animales encontrados cumplen el rol de reservorios, a partir del aislamiento o detección de ADN de Leishmania y su posterior tipificación.

Horario: 9 hs.

Lugar: Facultad de Ciencias de la Salud (Edificio B), Planta Baja, Aula de Nutrición Básica. Universidad Nacional de Salta.

Se ruega puntualidad.

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